Langkah yang harus dilakukan pada pembiakan bibit jamur kuping tahap ke dua ini tidak berbeda jauh dengan tahap pertama. Pembudidaya terlebih dahulu harus mempersiapkan berbagai peralatan yang dibutuhkan dan media tumbuh yang akan digunakan untuk pembiakan. Peralatan yang dibutuhkan antara lain botol bening berkapasitas 220 ml, tali karet, kantong plastik, kapas,dan autoclave. Sebelum digunakan, semua peralatan tersebut harus disterilisasi dan pastikan dalam keadaan kering.
Media tumbuh yang digunakan untuk pembiakan bibit jamur pada tahap kedua ini berupa campuran serbuk gergaji sebanyak 81%, dedak halus (bekatul) sebanyak 18% dan kalsium karbonat (CaCO3) sebanyak 1%. Sebagai contoh pencampuran komposisi media semai adalah serbuk gergaji sebanyak 100 kg, dedak halus sebanyak 10 kg, kapur atau kalsium karbonat sebanyak 1 kg, air secukupnya, dan tambahkan TSP sebanyak 0,5 kg pada campuran media tersebut.
Kriteria media tumbuh yang ideal untuk pertumbuhan bibit jamur kuping dalam pembiakan bibit jamur kuping tahap kedua diantaranya adalah mengandung unsur C (karbon) dalam bentuk karbohidrat yang cukup tinggi, mengandung unsur N dalam bentuk amonium. Kedua unsur tersebut akan dirombak menjadi protein. Selain unsur C dan N, media tumbuh juga harus mengandung unsur Ca yang berfungsi sebagai penetral asam oksalat yang dikeluarkan oleh miselium jamur. pH ideal antara 3-7, dengan kelembaban 68%, CO2 kurang dari 1%, dan suhu sekitar media antara 23°C — 25°C.
Selanjutnya media tersebut dimasukkan dalam botol kaca bening dan dipadatkan hingga penuh. Pemadatan dilakukan dengan membenturkan pantar botol secara pelan-pelan, kemudian bagian permukaan ditekan menggunakan jari. Isi kembali permukaan botol dengan media tumbuh, kemudian kembali ditekan menggunakan jari. Ulangi langkah tersebut hingga permukaan botol penuh.
Permukaan media tumbuh di dalam botol diberi lubang sedalam 3 cm dengan diameter kurang lebih 1 cm. Cara pembuatan lubang dilakukan dengan menggunakan kayu bulat yang ujungnya dibuat agak meruncing. Tekan permukaan media tersebut menggunakan kayu kemudian diangkat pelan-pelan agar tidak terkikis. Setelah diberi lubang, mulut botol disumbat dengan kapas dan ditutup plastik dan diikat dengan tali karet.
Media tumbuh yang sudah dimasukkan ke dalam botol tersebut kemudian disterilisasi menggunakan autoclave pada suhu 100-125°. Sterilisasi dilakukan selama kurang lebih satu jam. Saat memasukkan botol ke dalam autoclave, botol-botol tersebut disusun sedemikian rupa agar kapasitas pengisian autoclave bisa maksimal. Dengan demikian biaya persiapan dan waktu pembuatan media tumbuh bisa lebih efisien.
Selanjutnya media tumbuh dalam botol didinginkan, setelah agak dingin, dalam keadaan masih hangat dipindahkan ke dalam ruang pembiakan yang sudah disterilisasi. Biarkan selama 24 jam agar media tumbuh tersebut benar-benar dingin. Setelah dingin, boto-botol tempat media tumbuh tersebut diletakkan pada meja pembiakan yang sudah dipersiapkan.
Dukungan Teknis : Rois Efendi - 0852 3875 5088 - PIN BB 76339A3D